上期澤攸科技小編講了臺(tái)式掃描電鏡——磁性材料制樣方法，這期我們講用臺(tái)式掃描電鏡生物樣品制樣方法。

生物樣品應(yīng)在環(huán)境掃描或低真空的臺(tái)式掃描電鏡中進(jìn)行分析，這樣對(duì)這類樣品的制備就比較簡單、容易，觀察效果也會(huì)比較接近于活體時(shí)的實(shí)際情況。采用環(huán)境掃描電鏡來分析是理想的，若是采用傳統(tǒng)的臺(tái)式掃描電鏡來進(jìn)行分析，因多數(shù)生物樣品都是柔軟而且含有水分的，因此在進(jìn)行臺(tái)式掃描電鏡觀察前，要對(duì)生物樣品作相應(yīng)的處理，根據(jù)其樣品性質(zhì)的不同，其處理方法和程序也不同。主要可分為兩種類型：一類為含硅質(zhì)、鈣質(zhì)、角質(zhì)、琺瑯質(zhì)和纖維素較多而含水分又較少的硬組織樣品，如毛發(fā)、牙齒、骨頭、指甲、趾甲及植物的花粉、孢子、種子、果仁等，這類樣品一般經(jīng)干燥后，蒸鍍好導(dǎo)電膜等簡單的制備就可進(jìn)行觀察；另一類為大多數(shù)動(dòng)植物的肢體切片、器官及細(xì)胞等含水分較多的軟組織樣品，對(duì)于這類樣品，在作導(dǎo)電處理前，一般都需要經(jīng)過固定、脫水、干燥等處理。若未經(jīng)處理或處理不當(dāng)，則會(huì)造成樣品損傷和變形，還有可能會(huì)出現(xiàn)各種假象，因此樣品在用臺(tái)式掃描電鏡觀察之前要進(jìn)行干燥。干燥的方法有以下幾種：

1. 空氣干燥法又稱自然干燥法，就是將樣品暴露在大氣環(huán)境中讓樣品中的水分逐漸揮發(fā)，從而達(dá)到干燥的目的。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是簡單易行。缺點(diǎn)是在干燥過程中，樣品中的組織會(huì)由于水分揮發(fā)而產(chǎn)生收縮變形，因此這種方法只適用于表面較為堅(jiān)硬或含水分較少的樣品。

2. 臨界點(diǎn)干燥法是利用物質(zhì)在臨界狀態(tài)時(shí)，其表面張力等于零的特性，使樣品中的液體完全氣化，并以氣體方式揮發(fā)掉，從而達(dá)到干燥的目的，這樣就可以大大地減小表面張力的影響，盡可能多地保存樣品表面微細(xì)結(jié)構(gòu)的信息量。此法操作比較方便，所用的時(shí)間也不算長，用時(shí)約2~3h即可完成，所以是比較常用的干燥方法。

3. 冷凍干燥法是將經(jīng)過冷凍的樣品置于高真空中，通過升華去除樣品中所含的水分。冷凍干燥的基礎(chǔ)是樣品中的水分被冷凍成冰，冰從樣品中升華，即冰從固態(tài)直接轉(zhuǎn)化為氣態(tài)，不經(jīng)過中間的液態(tài)，不存在氣相和液相之間表面張力對(duì)樣品的作用，從而減輕在干燥過程中對(duì)樣品造成的損傷。

總之，對(duì)生物樣品的制備每一步、每一過程的處理都應(yīng)足夠重視，在制備過程中應(yīng)盡量做到：

1. 盡量保持樣品活體時(shí)的形貌和結(jié)構(gòu)，才能盡可能真實(shí)地反映出樣品本來的面目。

2. 在干燥過程中盡量減輕樣品的干癟、變形。

3. 所蒸鍍的金屬化膜都應(yīng)有良好的導(dǎo)電性能和高的二次電子發(fā)射率，以減少樣品荷電和提高清晰度。

4. 所蒸鍍的金屬化膜層應(yīng)>10nm，這不僅有利于散熱，增加二次電子的發(fā)射量，而且可減輕入射束造成的損傷。

5. 生物樣品不要蒸鍍碳膜，蒸碳多數(shù)是在高真空和高溫下進(jìn)行的，在這樣的環(huán)境下，樣品容易被灼傷。另外，碳膜的導(dǎo)電性和散熱性都沒有金屬膜好，其二次電子的產(chǎn)額也不如金屬膜高。

6. 為了克服鍍膜所帶來的負(fù)面影響和減少假象，有的人會(huì)采用組織導(dǎo)電法（又稱導(dǎo)電染色法），即利用某些金屬溶液對(duì)生物樣品中的蛋白質(zhì)、脂類和糖類等成分的結(jié)合作用，使樣品表面形成離子化或生成能導(dǎo)電性的金屬鹽類的化合物，從而提高樣品耐受電子束轟擊的能力和導(dǎo)電率。

7. 采集生物樣品的照片時(shí)，應(yīng)盡量采用低的加速電壓，如<5kV，同時(shí)也要采用小光欄、小束流，這有助于減少樣品的荷電，減輕損傷或燒傷。

8. 做成分分析時(shí)，臺(tái)式掃描電鏡的加速電壓<10kV，為了能有較高的計(jì)數(shù)率，涉用大面積芯片的能譜探測器，若沒有大面積的探測器，則可把能譜探測器朝樣品方向推進(jìn)，以增加大接收的立體角，一旦做完分析后，應(yīng)立即把探測器退回原位。若輕易采用大光欄和大束流，則易對(duì)樣品造成損傷。

澤攸科技自主研發(fā)的ZEM15臺(tái)式掃描電子顯微鏡對(duì)樣品適應(yīng)性強(qiáng)，操作便捷、快速成像、性能穩(wěn)定，掃描速度快。只需要鼠標(biāo)就可完成所有的操作，不需對(duì)中光闌等復(fù)雜步驟，聚焦消像散后可直接拍圖。主機(jī)集成高壓及控制系統(tǒng)，是目前市面上體積小的臺(tái)式掃描電鏡，便于移動(dòng)，安裝無需特殊環(huán)境。

國產(chǎn)臺(tái)式掃描電鏡

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